斜面孢子培养时，培养室的相对湿度对孢子形成的速度、数量和质量有很大影响。空气中相对湿度高时，培养基内的水分蒸发少，相对湿度低时，培养基内的水分蒸发多。例如，在我国北方干燥地区，冬季由于气候干燥，空气相对湿度偏低，斜面培养基内的水分蒸发的快，致使斜面下部含有一定水分，而上部易干瘪，这时孢子长得快，且从斜面下部向上长。冬季时空气相对湿度高，斜面内水分蒸发的满，这时斜面孢子从上部往下长，下部常因积存冷凝水，致使孢子生长。试验表明，子啊一定条件下培养斜面孢子时，在北方相对湿度控制在40%~45%，而在南方相对湿度控制在35%~42%，所得孢子质量较好。一般来说，真菌对湿度要求偏高，而放线菌对湿度要求偏低。
在培养箱培养时，如果相对湿度偏低，可放入盛水的平皿，提高培养箱内的相对湿度为了保证新鲜空气的较好，培养箱每天宜开启几次，以利于孢子生长，现代化的培养箱是恒温、恒湿，并可换气，不用人工控制。最适培养温度和湿度是相对的，例如相对湿度。培养基组分不同，对微生物的最适湿度会有影响。培养湿度、培养基组分不同也会影响微生物培养的最适相对湿度。
培养时间和冷藏时间 丝状菌在斜面培养基上的生长发育过程可分为5个阶段:孢子发芽和基内菌丝生长阶段;气生菌丝生长阶段;孢子形成阶段;孢子成熟阶段;斜面衰老菌丝自溶阶段。孢子的培养时间对孢子质量有影响。基内菌丝和气生菌丝内部的核物质和细胞质处于流动状态，如果把菌丝断开，各菌丝片断之间的内容不同的，有的片断中含有核粒，有的片断中和有核粒，而核粒的多少亦不均匀，该阶段的菌丝不适宜于菌种保存和传代。而孢子本身是一个独立的遗传体，其遗传物质比较完整，因此孢子用于传代和保存均能保持原始菌种的基本特征。但是孢子本身亦有年轻与衰老的区别。一般来说衰老的孢子不如年轻孢子，因为衰老的孢子已在逐步进入发芽阶段，核物质趋于分化状态。孢子的培养工艺一般选择在孢子成熟阶段时终止培养，此时显微镜下可见到成串孢子或游离的分散孢子，如果继续培养，则进入斜面衰老菌丝自溶阶段，表现为斜面外观变色。发暗或黄、菌层下陷、有时出现白色斑点或发黑。白斑便是孢子发芽长出第二代菌丝，黑色显示菌丝自溶。斜面孢子的的冷擦时间，对包子质量也有影响，其影响随菌种不同而异，总的原则是冷藏时间宜短不宜长。曾有报道，在链霉素生产中，斜面孢子在6度冷藏2个月后的发酵单位比冷擦1个月的低18%，冷藏3个月后则降低35%。
