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菌种的保藏
2014-12-26   来源:新农资360网   

一个优良的菌种被选育出来以后,要保持其生产性能的稳定、不污染杂菌、不死王,这就是需要对菌株进行保藏。


一,菌种保藏的原理

菌种保藏主要是根据菌种的生理、生化特性,人工创造条件使菌体的代谢活动处于休眠状态。保藏时,一般利用菌种的休眠体,创造最有利与休眠活动的环境条件,如低温、干燥、隔绝空气或氧气、缺乏营养物质等,使菌体的代谢活性处于最低状态,同时也应考虑到方法经济、简便。由于微生物种类繁多,代谢特点各异,对各种外界环节因素的适宜能力不一致,一个菌种选用何种方法保藏较好,要根据菌体情况而定。


二, 菌种保藏方法
1. 斜面低温保藏法 本方法是利用低温降低菌种的新陈代谢,使菌种的特性在短时期内保持不变。将新鲜斜面上长好的菌体或孢子,置于4度冰箱中保存。一般的菌种均可用词方法保存1~3个月。保存期间要注意冰箱的温度,不可波动太大,不能在0度以下保存,否则培养基会结冰脱水,造成菌种性能衰退或死亡。


2. 液体石蜡封存保藏法 在斜面菌种上加入灭菌后的液体石蜡,用量高出于斜面1cm,使菌种与空气隔绝,试管直立,置于4度冰箱保存。保存期约1年。此法适用于不能以石蜡为碳源的菌种。液体石蜡采用蒸汽灭菌。


3. 固体曲保藏法 这是根据我国传统制曲原理加以改进的一种方法,适用于产孢子的真菌,该法采用麸皮、大米、小米或麦粒等天然农产品为产孢子培养基,使菌种产生大量的休眠体后加以保存。该法的要点是控制适当的水分。例如在采用大米保藏孢子时,先取大米充分吸水膨胀,然后倒入搪瓷内蒸15min,最后抽查含水量,合格后备用。将要保存的菌种制成孢子悬浮液,取适量加入已灭菌的大米培养基中,敲散拌匀,铺成斜面状,在一定温度下平培养,在培养过程中要注意翻动,待孢子成熟后,取出置冰箱保存,或抽真空至水分含量在10%以下,放在盛有干燥剂的密封容器中低温或室温保存。保存期为1~3年。


4. 沙土管保藏法 本方法是用人工方法模拟自然环境使菌种得以栖息。使用于产孢子的放线菌、霉菌以及产芽孢的细菌。沙土是沙和土的混合物,沙和土的比例为3:2或1:1,将黄沙和泥土分别洗净,过筛,按比例混合后,装入小试管内,装斜高度约为1cm,经间歇灭菌2~3次,灭菌烘干,并作无菌检查后备用。将要保存的斜面菌种刮下,直接与沙土混合;或用无菌水洗下孢子,制成悬浮液,再与沙土混合。混合后的沙土管放在盛有五氧化二磷或无水氧化钙的干燥器中,用真空泵抽气干燥后,放在干燥低温环境下保存。此法保存期可达1年以上。


5. 冷冻干燥法 此法的原理是在低温下迅速地 将细胞冻结以保持细胞结构的完整,然后在真空下时水分升华。这样菌种的生长和代谢活动处于极低水平,不易发生变异或死亡,因而能长期保存,一般为5~10年。此法适用于各种微生物。具体的做法是将菌种制成悬浮液,与保护剂混合,放在瓶内,用低温酒精或干冰使之速冻,在低温下用真空泵抽干,最后放真空瓶中存放,低温保存备用。


6. 液氮超低温保藏法 前面集中菌种保藏法,在保存过程中菌种都有不同程度的死亡,特别对一些不产孢子的菌体保存的效果不够理想。微生物在-130度以下,新阵代谢活动停止,这种环境下可永久保存微生物菌种。液氮的温度可达-196度,用液氮保存微生物菌种已获得满意的结果。液氮超低温保藏法简便易行,关键是要有液氮罐。低温冰箱等设备。该方法要点是:将要保存的菌种置于10%甘油或二甲基亚砜保护剂中,密封与瓶中,现将菌液降至0度,再以每分钟降低1度的速度,一直降至-35度,然后将瓶子放入液氮罐。



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标签:保藏 菌种

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